猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒使用说明书
【简介】
试剂盒由抗原包被板，羊抗猪酶标二抗及其它试剂制成，应用间接ELISA检测猪血清中抗猪瘟病毒抗体。
【用途】
用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体。适用于猪场猪瘟疫苗免疫状况的评价以及感染猪的血清学诊断。
【原理】
本试剂盒是采用猪瘟抗原包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪瘟病毒的特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。
【试剂盒主要成分】 
1  抗原包被板                           1块                    （96孔/块）
2  阴性对照血清 （蓝色盖子）            1管                    （0.25ml/管）
3  阳性对照血清 （红色盖子）            1管                    （0.25ml/管）
4  羊抗猪酶标二抗（蓝色盖子）           1瓶                    （10ml/瓶）
5  20倍浓缩洗涤液（白色盖子）           1瓶                    （15ml/瓶）
6  底物液A（红色盖子）                 1瓶                    （5ml/瓶）
7  底物液B（黑色盖子）                 1瓶                    （5ml/瓶）
8  终止液（蓝色盖子）                   1瓶                    （5ml/瓶）
9  样品稀释液（黄色盖子）               1瓶                    （25ml/瓶）
10 血清稀释板                          1块                    （96孔/板）
11 说明书                               1张
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液配制】
使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5~10分钟），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在2~8℃可以存放7天。
【样品和对照稀释】
样品稀释： 1:40的体积稀释待检血清样品（195μl样品稀释液中加5μl待检血清样品）。
对照稀释：在血清稀释板中按1:40分别稀释阳性对照和阴性对照（234μl样品稀释液中加6μl对照血清）。
【注意事项】
1  试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2~8℃。
2  不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3  不要用口移液。
4  底物液B不要暴露于强光，避免接触氧化剂。 
5  未使用的抗原包被板切记不要撕开上面的封口膜。
6  待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。
7  浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
8  严格按照操作说明书可以获得最好的结果。
【操作步骤】 
1  取抗原包被板（根据样品多少，可拆开分次使用），分别将稀释好的待检血清和对照各取100μl加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。
2  甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μl，静置3分钟倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次，
3  每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃温育30分钟。
4  洗涤5次, 方法同2。切记每次在干净吸水纸上拍干。
5  每孔先加底物液A一滴（50?l）、再加底物液B一滴（50?l）,混匀,室温(18℃~25℃)避光显色10分钟。
6  每孔加终止液一滴(50μl)，10分钟内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。
【结果判定】 在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.6，阴性对照孔平均OD630nm值必须＜0.3。 
样品OD630nm值＞0.35，判为阳性；样品OD630nm值＜0.35，判为阴性。
注意：用620~650纳米波长测定结果均有效。
【贮    存】  2~8℃避光保存 
【有 效 期】  10个月